分离胶与浓缩胶的成分区别

分离胶与浓缩胶的成分区别

1、浓缩胶：在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中，同一介质的凝胶浓度分为 两种，负极的加样侧一般浓度为2%〜5%。

2、分离胶：不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳中的一部分，其组成、缓冲液pH和凝胶孔径与浓缩凝胶不同。

3、它具有分子筛效应的小孔径凝胶。

4、浓缩胶过程：由于浓缩胶浓度低、孔径大，分离胶浓度高，孔径小。

5、带电蛋白质或核酸离子在大孔径凝胶中运动时，阻力小，运动速度快。

6、当接近小孔径凝胶时，阻力较大，移动速度减慢，使样品浓缩，形成窄带，减少电泳过程中的带扩散。

7、分离胶过程：蛋白质或核酸在电泳过程中由浓缩胶进入分离胶，由于分子筛的作用，小分子物质容易通过，阻力小，迁移速度快。

8、大分子由于较大的电阻而滞后，因此，即使具有类似净电荷和相等的游泳率的物质，也会根据分子量的不同而通过分子筛效应从凝胶中分离出来。

为什么先分离胶后浓缩胶

1、上面是浓缩胶，下面是分离胶，所以先加分离胶，后加浓缩胶。

2、这样做的原理是，浓缩胶先将蛋白质压成一条线，在再分离胶中按照不同的分子量大小分离。

3、浓缩胶和分离胶的PH值不同，前者主要表现为浓缩效用，后者表现为电荷效用和分子筛效用。

4、浓缩效应主要在浓缩胶中完成，浓缩胶的pH6.8，在这个pH条件下，缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离，Gly的等电点为6.0，仅少数解离为负离子，在电场中移动速度很慢。